Western Blot Protokolü
Western blotting, karmaşık karışımlardaki spesifik proteinleri tespit etmek için yaygın olarak kullanılan bir immünolojik yöntemdir. Jel elektroforezinin ayırma gücünü antikorların özgüllüğüyle birleştirir. İşlem, hücre veya dokulardan protein ekstraksiyonuyla başlar ve ardından moleküler ağırlığa göre SDS-PAGE ile ayırma işlemine geçer. Proteinler daha sonra bir membrana (tipik olarak nitroselüloz veya PVDF) aktarılır ve spesifik antikorlar kullanılarak tespit edilir. Birincil antikor hedef proteine bağlanırken, bir haberci enzime konjuge olan ikincil antikor, kemilüminesan, floresan veya kolorimetrik tespit yoluyla görüntülemeyi sağlar.
