Etiketleme Kiti Sık Sorulan Sorular ve Yanıtlar
S1:Küçük molekül boya etiketleme kitleri ile hangi tür antikorlar veya proteinler etiketlenebilir?
C:Farklı türlerden gelen konvansiyonel IgG etiketlenebilir. IgM antikorları da uygun boya dozu veya etiketleme tamponu ayarlamaları ile etiketlenebilir. IgY, IgD ve IgA gibi diğer antikor türleri doğrulanmamıştır, ancak teorik olarak antikor veya protein üzerinde serbest primer amin grupları olduğu sürece etiketlenebilir.
S2:Etiketlenecek materyal için dikkat edilmesi gerekenler nelerdir?
C:Etiketlenecek materyal serbest primer amin veya N-terminallere sahip olmalıdır. Numune Tris, gliserol, protein veya amin grupları içeren reagentlar içermemelidir.
S3:Küçük veya iz miktarda etiketleme yapılabilir mi (örneğin, 10 μg'dan az antikor proteini)?
C:Kılavuzdaki mevcut yöntem 0.02-2 mg antikor etiketlemek içindir. Daha küçük miktarlar için özelleştirme veya etiketleme hizmeti sağlayabiliriz. Gelecekte 10 μg'dan az antikor proteini etiketlemek için bir kit de piyasaya süreceğiz.
S4:Bir madde (örneğin, folik asit/peptit) etiketleme kiti kullanılarak FITC/Fluor594 ile etiketlenebilir mi?
C:Bir maddenin serbest primer amin grupları varsa, teorik olarak etiketlenebilir. Proteinler için, primer aminlerin (lizin) sayısı dikkate alınmalıdır. Küçük moleküller için, aminlerin sayısı etiketlemeyi belirler. Folik asitin azot içeren heterosiklusunda bir amin grubu vardır, bu teorik olarak FITC veya Fluor594 ile etiketlenebilir. Ancak, bu amin grubunun nükleofililiği nispeten zayıftır ve etiketleme verimliliği iyi olmayabilir. Ek olarak, etiketlenen maddenin boyutu, arıtma için uygun ultrafiltrasyon tüpü ile eşleşmelidir, bu müşterinin deneysel amacına göre karar vermesi gereken bir durumdur.
S5:Biotin/küçük molekül floresan boyaların etiketleme verimliliğini (DOL) nasıl artırabilirim?
C:Denemek için birçok yol vardır.
1) Reaksiyondaki boya oranını proteine göre artırın.
2) Reaksiyon sistemindeki protein konsantrasyonunu artırın.
3) Reaksiyon sıcaklığını ve süresini uygun şekilde artırın.
4) Hedef protein için etiketleme tamponunu değiştirin.
S6:Daha yüksek etiketleme verimliliği her zaman daha iyi deneysel sonuçlara mı yol açar?
C:Hayır. Genel olarak, konvansiyonel IgG antikorları için 2 ile 9 arasında bir DOL daha uygundur. DOL bu aralığın üzerine çıkarsa, deneysel sonuçlar genellikle kötüleşir. Spesifik deneysel sonuçlar, etiketlenen proteinin ve antikorun özelliklerine bağlıdır ve optimal DOL gerçek deneysel sonuçlara göre belirlenmelidir.
S7:Küçük molekül boyalar ile etiketlenmiş rekombinant proteinlerin konsantrasyonu nasıl nicelendirilir ve belirlenir?
C:Rekombinant proteinleri nicelendirmek için çeşitli yöntemler vardır, örneğin BCA yöntemi, UV absorbsiyon yöntemi, Bradford, Coomassie Brilliant Blue, Lowry yöntemi vb. protein konsantrasyonunu ölçmek için. Alternatif olarak, kılavuza göre absorbsans ölçülerek konsantrasyon hesaplanabilir. Her yöntemin kısıtlamaları vardır ve müşteriler gerçek durumlarına göre uygun ölçüm şemasını seçebilirler.
S8:Biotin etiketleme kitleri antikorlar dışındaki diğer proteinleri etiketlemek için kullanılabilir mi?
C:Biotin etiketleme kitlerinin prensibi, aktive edilmiş biotinin ester bağının hedef materyal üzerindeki amin grubu ile reaksiyona girerek kararlı bir amid bağı oluşturmasıdır. Ek olarak, proteinlerin N-terminalleri de etiketlenebilir. Bir proteinin primer aminleri varsa, örneğin lizin, etiketlenebilir.
S9:Biotin etiketleme kiti kullanılarak protein etiketlemesinde reaksiyon oranı 20:1 midir?
C:Proteinin moleküler ağırlığı ve taşıdığı lizin sayısı dikkate alınmalıdır. Genel olarak, 1–5 mg/mL konsantrasyonda etiketleme önerilir. Lizin sayısı 10–15 civarındaysa, 1:20 oranı kullanılabilir. Daha fazla lizin varsa, oran ayarlanmalıdır.
S10:Biotinle etiketlenmiş antikorların verimliliği nasıl tespit edilir?
C: Sunduğumuz biotin etiketleme kitleri birçok antikor için etiketleme oranı optimize edilmiştir. Etiketlenmiş antikorların geri kazanım oranı göz önüne alındığında, tipik olarak %80'in üzerindedir. Etiketlenen antikor miktarı ne kadar fazlaysa, geri kazanım oranı o kadar yüksektir. Biotin etiketleme verimliliğinin hesaplama yönteminin üreticiler arasında farklılık gösterdiği ve etiketleme etkisini değerlendirmek için tek kriter olmaması gerektiği unutulmamalıdır.
S11:Çözülmüş aktive edilmiş biotinin/küçük molekül floresan boyaların raf ömrü ne kadardır?
C:Aktive edilmiş biotinin/küçük molekül floresan boyaların kuru tozu, açılmadan önce -20°C'de bir yıldan fazla kararlı şekilde saklanabilir. Ancak, açma/çözmeden sonra, iyi kapatılmalı, ışık ve nemden korunmalı ve bir hafta içinde kullanılmalıdır.
S12:Biotin veya küçük molekül boyalarla etiketlenmiş protein steril midir ve nasıl sterilize edilir veya dezenfekte edilir?
C:Etiketleme süreci genellikle açık alanda gerçekleştirilir, bu nedenle etiketlenmiş protein tamamen steril olmayacaktır. Sterilizasyon veya dezenfeksiyon yöntemleri şunları içerir:
Küçük hacimlerde (örneğin, 50–500 μL) etiketlenmiş protein için, vakum dondurarak kurutma başlangıç sterilizasyonu için kullanılabilir veya yüksek hızlı santrifüj bakterileri çöktürmek ve süpernatant almak için kullanılabilir, böylece çoğu bakteri uzaklaştırılır.
Daha büyük hacimlerde (1 ml'den fazla) etiketlenmiş protein için, iğne tipi steril filtre filtrasyon ve sterilizasyon için kullanılabilir.
S13:Biotin/küçük molekül boyalar ile protein etiketlemenin verimliliği nasıl tespit edilir ve hesaplanır?
C:Etiketleme verimliliğinin hesaplanmasını anlamak için birkaç yol vardır:
1)DOL: Her protein başına etiketlenen boyaların ortalama sayısı. DOL ne kadar yüksekse, etiketleme verimliliği o kadar yüksektir.
2)DOL'nin feed oranına oranı. Örneğin, eğer feed oranı d...