ELISA türleri
ELISA, antijenleri ve antikorları da belirlemek için kullanılabilir. Bu testte üç gerekli reaktif vardır: (1) Katı faz taşıyıcılar tarafından adsorbe edilen antijenler veya antikorlar. (2) Enzimle etiketli antijenler veya antikorlar. (3) Enzimatik reaksiyonlar için substratlar. Reaktif ve örneğin kaynağına ve testin özel koşullarına bağlı olarak, çeşitli test yöntemleri tasarlanabilir.
ELISA'nın tespiti ve sınıflandırılması hakkında farklı görüşler vardır ve farklı literatürler, ilke veya işlem açısından farklı sınıflandırma görüşlerine sahiptir. Burada ELISA'yı aşağıdaki dört kategoriye ayırıyoruz ve daha sonra her kategoriyi ayrıntılı olarak açıklıyoruz: (1) Doğrudan ELISA; (2) Dolaylı ELISA; (3) Sandviç ELISA; (4) Rekabet inhibitörü ELISA. Tüm diğer ELISA yöntemleri bu dört tür ELISA'ya aittir veya bu dört tür ELISA'nın kombinasyonlarından türetilmiştir.
1. Doğrudan ELISA
Doğrudan ELISA, prosedür bakımından en basit ELISA türüdür. Yöntemi, bir antijenin veya antikorun doğrudan bir katı faz taşıyıcıya kaplanmasını, ardından enzimle etiketli bir antikor veya antijen ile spesifik bağlanmayı ve daha sonra substratın renklenmesini kataliz etmek için enzimin kullanımını içerir. Gelişen renk derinliği, eklenen enzimle etiketli antikor veya antijen miktarıyla orantılıdır. Doğrudan ELISA'nın uygulanması çok basit olsa da ve adımları nispeten kısa olsa da, uygulama alanı hala oldukça sınırlıdır. Önemli bir sebep, bu ELISA türünde yalnızca bir adımda sinyal amplifikasyonu olduğudur, bu nedenle duyarlılığı pek yüksek değildir. Ayrıca, tespit edebileceği maddeler de çok sınırlıdır, çünkü yalnızca enzimle etiketli molekülleri ölçebilir.
2. Dolaylı ELISA
Dolaylı ELISA genellikle antikor tespiti için kullanılır. Başlangıç prosedürü adımları, doğrudan ELISA'nınkiyle büyük ölçüde örtüşür, temel fark şudur ki dolaylı ELISA'da, önceden kaplanmış antijene bağlanan molekül, enzimle etiketli bir antikor değil, etiketsiz bir antikordur. Daha sonra ikinci bir antikor eklenir; bu ikincil antikor enzimle etiketlidir ve birincil antikora spesifik olarak bağlanabilir. Son olarak, renklenmeye neden olmak için bir substrat getirilir ve sonuçlar yorumlanır. İkincil antikorun konsantrasyonu sabit olduğunda, son renk yoğunluğu birincil antikor miktarıyla pozitif korelasyon gösterir.
İkincil antikorlar genellikle poliklonal antikorlar olduğundan, tek bir birincil antikor molekülüne birden fazla ikincil antikor molekülü bağlanabilir. Bu arada, bir ikincil antikor molekülüne birden fazla enzim molekülü bağlanabilir, bu da tespit duyarlılığını önemli ölçüde artırır. Ayrıca, ikincil antikorlar görece kolay hazırlanır ve uzun zamandır ticari olarak mevcuttur. Bu, operatörlerin birincil antikorları enzimle etiketlemesine gerek bırakmaz, böylece iş yükü önemli ölçüde azalır.
Dolaylı ELISA, antikor titre, serum titre ve monoklonal antikorların taranmasında çok önemli bir rol oynar. Klinik teşhislerde, belirteç antikorlarını tespit etmek için de önemli bir yöntem olarak hizmet eder.
3. Sandviç ELISA
Genel olarak, sandviç ELISA, doğrudan sandviç ELISA ve dolaylı sandviç ELISA olmak üzere iki türe ayrılabilir.
Doğrudan sandviç ELISA, çift antikor sandviç ELISA ve çift antijen sandviç ELISA olmak üzere iki alt türe daha bölünebilir.
Çift antikor sandviç ELISA Birinci antikor (yakalama antikoru) bir katı faz taşıyıcıya kaplanır. Daha sonra, tespit edilecek antijen eklenir. Inkübasyondan sonra ikinci antikor (tespit antikoru) girer. Yakalama antikoru ve tespit antikoru, farklı epitoplara hedef alan iki monoklonal antikor veya aynı antijene hedef alan bir monoklonal antikor ve bir poliklonal antikor olabilir. Ancak tespit antikoru mutlaka enzimle etiketlenmelidir. Çift antikor sandviç ELISA için hedef analit (tespit edilecek antijen), iki veya daha fazla epitoppu içermelidir; aksi takdirde tespit antikoru antijene bağlanamaz. Örneğin, haptenler ve küçük moleküllü antijenler, çift antikor sandviç ELISA kullanılarak tespit edilemez.
Çift antijen sandviç ELISA İşlem, çift antikor sandviç testine temel olarak benzerdir. Fark, kaplama maddesinin bir antijen olması, tespit edilecek nesnenin bir antikor olması, ardından enzimle etiketli bir antijen eklenmesi ve daha sonra renklenmeye neden olmak için bir substrat eklenmesidir. Çift antijen sandviç ELISA'nın temel operasyonel prosedürü, dolaylı ELISA'nınkine büyük ölçüde eşdeğerdir, ancak temel fark, dolaylı ELISA'da kullanılan enzimle etiketli ikincil antikor yerine spesifik bir antijen kullandığındadır. Bu tasarım, hedef antikora çift antijenlerin spesifik bağlanması yoluyla taramayı başarıyor, böylece spesifik olmayan antikorlar ve çapraz reaksiyonlar gibi engelleyici faktörleri etkili bir şekilde azaltıyor, bu nedenle tespit özgüllüğü dolaylı ELISA'dan daha iyidir. Ancak bu yöntem de belirgin teknik maliyet sınırlamalarına sahiptir: kaplama antijeni ve enzimle etiketli antijen olmak üzere iki anahtar reaktifin eşzamanlı olarak hazırlanmasını gerektirir ve bu iki antijenin saflığı ve aktivite stabilitesi için sıkı gereksinimler vardır, bu da genel Ar-Ge ve üretim maliyetlerinin dolaylı ELISA'dakinden önemli ölçüde daha yüksek olmasına neden olur.
Dolaylı sandviç ELISA Prensibi şu şekildedir: tür spesifik bir antikor, yakalama antikoru olarak bir katı faz taşıyıcıya kaplanır. Bir bloklama adımından sonra, tespit edilecek antijen eklenir ve inkübe edilir. Yıkamadan sonra, başka bir tür spesifik antikor, tespit antikoru olarak eklenir. Son olarak, enzimle etiketli bir ikincil antikor getirilir ve daha sonra renklenmeye neden olmak için bir substrat eklenir.
Doğrudan çift antikor sandviç ELISA'ya kıyasla, dolaylı sandviç ELISA, tespit antikorunu spesifik olarak tanıyan bir enzimle etiketli ikincil antikoru dahil eder. Bu, tüm sistemde ek bir sinyal amplifikasyon adımı eklemek anlamına gelir, böylece son sonuçlar doğrudan çift antikor sandviç ELISA'dakinden daha duyarlı olur. Bu arada, dolaylı sandviç ELISA'daki enzimle etiketli ikincil antikor yalnızca tespit antikorunu tanıyabilir ve yakalama antikorunu tanıyamaz, böylece sistemin özgüllüğü de garanti edilir. Bu nedenle şirketimizin çoğu ELISA kiti bu yöntemi benimseyerek toplamda iki binden fazladır. Herhangi bir ihtiyacınız varsa, lütfen bizimle iletişime geçin. İhtiyacınız olan ürünleri kontrol etmek için web sitemizi ziyaret edin.
4. Rekabet Inhibitörü ELISA
Rekabet Inhibitörü ELISA, Bloking ELISA olarak da bilinir, temel prensibi, önceden tasarlanmış bir sistemi engellemek için tespit edilecek antijen veya antikorun kullanılmasını içerir. Son renk sonucu, tespit edilecek antijen veya antikorun neden olduğu engelleme derecesiyle negatif korelasyon gösterir. Rekabet Inhibitörü ELISA, yüksek esneklik taşır ve onun temelinde daha karmaşık deney protokolleri tasarlanabilir, böylece Doğrudan Rekabet Inhibitörü ELISA, Dolaylı Rekabet Inhibitörü ELISA ve Sandviç Rekabet ELISA gibi çeşitli özel ELISA yöntemleri türetilir. Burada, prensibi kısaca açıklamak için yalnızca Doğrudan Rekabet Inhibitörü ELISA ve Dolaylı Rekabet Inhibitörü ELISA örnek olarak alınmaktadır.
Doğrudan Rekabet Inhibitörü ELISA Antijen bir katı faz taşıyıcıya önceden kaplanır ve enzimle etiketli spesifik antikorlar eklenir. Deney sırasında, tespit edilecek antijen veya antikor getirilir. Tespit edilecek hedef bir antijen ise, katı faz taşıyıcıda önceden kaplanmış antijenle, eklenen enzimle etiketli antikorlar için rekabet eder. Tespit edilecek hedef bir antikor ise, katı faz taşıyıcıda kaplanmış antijene bağlanmak için eklenen enzimle etiketli antikorlarla rekabet eder. Her iki durumda da, yenilmiş olan enzimle etiketli antikorlar, yıkama adımında yıkanır, ardından renklenmeye neden olmak için bir substrat eklenir. Renk sonucu, tespit edilecek antijen veya antikor miktarıyla ters orantılıdır. Doğrudan rekabet inhibitörü ELISA, iki adımda sinyal amplifikasyonu içerir, bu nedenle nispeten yüksek duyarlılığa sahiptir. Katı faz taşıyıcıyı önceden kaplamayı ve enzimle etiketli antikorları eklemeyi takiben, deney yalnızca tespit edilecek antijenin veya antikorun seyreltirilmesini ve sistemi reaksiyon için eklemeyi gerektirir, bu da ELISA operasyon sürecini büyük ölçüde basitleştirir.
Dolaylı Rekabet Inhibitörü ELISA Antijen bir katı faz taşıyıcıya önceden kaplanır ve bu antikora karşı spesifik bir antikor ve karşılık gelen enzimle etiketli ikincil antikor sırayla eklenerek ön bir sistem oluşturulur. Deney sırasında, tespit edilecek seyreltirilmiş antijen eklenir ve test edilecek örnekteki antijen, ön sistemde katı faz taşıyıcıya bağlı antijenle spesifik antikora bağlanmak için rekabet eder. Benzer şekilde, test edilecek örnek bir antikor da olabilir. Dolaylı rekabet inhibitörü ELISA, daha yüksek tespit duyarlılığına sahiptir, bu da enzimle etiketli ikincil antikor tarafından aracılık edilen sinyal amplifikasyon efekti sayesinde olur. Bu yöntem, birincil antikorun etiketlenmesini gerektirmez; bunun yerine, çeşitli farklı birincil antikorlara uyum sağlamak için ticari enzimle etiketli ikincil antikorlar kullanabilir, bu da daha güçlü çok yönlülük sağlar. Aynı zamanda, antijen etiketleme sürecinin maliyetini ve teknik zorluğunu etkili bir şekilde azaltır. Bu yöntem, yeni piyasaya sürülen ürün gıda güvenliği test kitinde kullanılmaktadır. Herhangi bir ihtiyacınız varsa, bizimle iletişime geçebilirsiniz. İhtiyacınız olan ürünleri kontrol etmek için web sitemizi ziyaret edin.
Yukarıda tanıtılan birkaç temel ELISA türünün yanı sıra, başka ELISA türleri de gerçek ihtiyaçlara göre esnekçe tasarlanabilir. Örneğin, biyotin-avidin sistemi, sistemin amplifikasyon faktörünü artırmak için dahil edilebilir; başka bir örnek, katı faz taşıyıcının yükleme kapasitesini artırmak veya sistemin özgüllüğünü artırmak için etiketsiz ikincil antikorlar, Protein A, Protein G vb. dahil edilebilir.
 | Felicia Felicia, EnkiLife'de teknik destek uzmanıdır ve antikor geliştirme, optimize etme ve ELISA testi tasarımı ve uygulama alanında geniş profesyonel deneyime sahiptir. Müşterilerimizin uygun antikor ürünlerini seçmelerine, ELISA deney protokollerini optimize etmelerine ve süreçte karşılaştıkları teknik zorlukları çözmelerine yardımcı olmakla görevli olup böylece yaşam bilimleri araştırma projelerinin sorunsuz ilerlemesini desteklemektedir. |