ÖNEMLİ ÖZELLİKLER
| Tam Ad | Immunoglobulin E |
|---|---|
| Eşanlamlı | IgE |
| Test Tipi | Sandviç |
| Reaktivite | Fare |
| Aralık | 125-8000ng/mL |
| Duyarlılık | 75ng/mL |
| Örnek Tipi | Serum, plazma ve diğer biyolojik sıvılar |
| Örnek Hacmi | 100μL |
| Tespit Dalga Boyu | OD450 |
| Taşıma Sıcaklığı | 2-8°C |
| Özgüllük | Kit, örneklerde Fare IgE'yi tespit etti ve önemli türler arası reaksiyonlar bulunamadı |
| Mikroplaka | 96 kuyulu plak, 12 x 8 kuyuluk şeritlere bölünebilir |
TEST İLKESİ
| Bu ELISA kiti Sandviç-ELISA prensibini kullanır. Bu kitte sağlanan mikro ELISA plakası, Fare IgE'sine özgü bir antikorla önceden kaplanmıştır. Standartlar veya numuneler mikro ELISA plakası kuyularına eklenir ve özgül antikorla birleştirilir. Ardından, her bir mikro plaka kuyusuna sırayla Fare IgE'sine özgü biyotinlenmiş bir tespit antikoru ve Avidin-Yaban Turpu Peroksidaz (HRP) konjugatı eklenir ve inkübe edilir. Serbest bileşenler yıkanır. Her bir kuyuya substrat çözeltisi eklenir. Yalnızca Fare IgE, biyotinlenmiş tespit antikoru ve Avidin-HRP konjugatı içeren kuyular mavi renkte görünür. Enzim-substrat reaksiyonu, durdurma çözeltisinin eklenmesiyle sonlandırılır ve renk sarıya döner. Optik yoğunluk (OD), 450 nm ± 2 nm dalga boyunda spektrofotometrik olarak ölçülür. OD değeri, Fare IgE konsantrasyonuyla orantılıdır. Örneklerdeki Fare IgE konsantrasyonunu, örneklerin OD'sini standart eğri ile karşılaştırarak hesaplayabilirsiniz. |
ELISA KIT BILEŞENLERİ
Teslim alındıktan sonra, talimatlarda önerildiği gibi derhal paketini açın ve depolayın.
| Bileşenler | Teknik Özellikler | Depolama ve Notlar |
|---|---|---|
| Mikro Plaka | 96T: 8 kuyu×12 şerit 48T: 8 kuyu×6 şerit | Açılmamış: -20°C, 12 ay Kullanılmamış: Aluminyum folyo torbasına geri koyun ve kapatın, -20°C'de saklayın. |
| Referans Standart | 96T: 2 flakon 48T: 1 flakon | Açılmamış: -20°C, 12 ay Her deney için taze çözülmüş standartlar kullanın. Çözülmeden sonra kullanılmayan standartları atın. |
| Biotinileştirilmiş Tespit Antikor Konsantresi (100×) | 96T: 120μL×1 flakon 48T: 60μL×1 flakon | Açılmamış: -20°C, 12 ay Kullanılmamış: Konsantresi kapatın ve -20°C'de saklayın, çalışma solüsyonunu atın. |
| HRP Konjugatı Konsantresi (100×) | 96T: 120μL×1 flakon 48T: 60μL×1 flakon | Açılmamış: -20°C(Işık koruması), 12 ay Kullanılmamış: Konsantresi kapatın ve -20°C'de saklayın, çalışma solüsyonunu atın. |
| Biotinileştirilmiş Tespit Antikor Seyreltici | 14mL×1 flakon | 2-8℃, 12 ay |
| HRP Konjugatı Seyreltici | 14mL×1 flakon | 2-8℃, 12 ay |
| Referans Standart & Örnek Seyreltici | 20mL×1 flakon | 2-8℃, 12 ay |
| Yıkama Tamponu Konsantresi (25×) | 30mL×1 flakon | 2-8℃, 12 ay |
| Substrat Reajenti(TMB) | 10mL×1 flakon | 2-8°C(Işık koruması),12 ay |
| Durdurma Solüsyonu | 7mL×1 flakon | 2-8°C/Oda sıcaklığı |
TEST PROSEDÜRLERİ
TİPİK VERİLER
Fare IgE ELISA Standart Eğrisi
Tipik veriler yalnızca referans olarak sunulmuştur ve eğriler her deney için yeniden çizilmelidir. Uyarlama için Lojistik fonksiyon önerilir.
HASSASİYET
Test İçi Hassasiyet (Bir test içindeki hassasiyet): Test içi hassasiyeti değerlendirmek için bilinen konsantrasyonlara sahip üç örnek bir plakada yirmi kez test edildi.
Testler Arası Hassasiyet (Testler arasındaki hassasiyet): Testler arası hassasiyeti değerlendirmek için bilinen konsantrasyonlara sahip üç örnek yirmi ayrı testte test edildi. Testler, en az üç teknisyen tarafından iki parti bileşen kullanılarak gerçekleştirildi.
| Test İçi Hassasiyet | Testler Arası Hassasiyet | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Örnek | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| Ortalama (ng/mL) | 392.42 | 869.04 | 2972.95 | 383.31 | 954.56 | 3083 |
| Standart Sapma | 20.41 | 39.89 | 143.59 | 20.01 | 39.52 | 167.1 |
| CV(%) | 5.2 | 4.59 | 4.83 | 5.22 | 4.14 | 5.42 |
GERİ DÖNÜŞÜM
Çeşitli matrikslerde test aralığının tamamında örneklerde üç farklı düzeye ekilen Fare IgE'ün geri dönüşü değerlendirildi.
| Örnek Tipi | Aralık (%) | Ortalama Gerçekleşme (%) |
|---|---|---|
| Serum(n=8) | 92-106 | 97 |
| EDTA plazması (n=8) | 95-107 | 101 |
| Hücre kültürü ortamı (n=8) | 92-105 | 97 |
DOĞRULUK
Testin doğruluğunu değerlendirmek için, çeşitli matrikslerde yüksek konsantrasyonlarda Fare IgE içeren ve/veya ilave edilmiş örnekler, testin dinamik aralığında değerlere sahip örnekler üretmek için Referans Standart & Örnek Seyrelticide seyreltildi.
