Aşağıda listelenen ELISA örnek toplama ve saklama koşulları genel kılavuz olarak tasarlanmıştır. Spesifik protokoller hücre hattı veya doku tipine göre değişebilir. Örnekleri uzun süre saklarken, örnek stabilitesinin test edilmesi tavsiye edilir. Tüm örnek türleri için tekrarlanan donma-çözülme döngülerinden kaçının.
Toplama: Kanı serum ayırıcı tüpe toplayın. Kanın oda sıcaklığında 30 dakika pıhtılaşmasını bekleyin. 1000×g'de 15 dakika santrifüjleyin ve serumu toplayın.
Saklama: Serum örneklerini kısa süreli saklama (6 aydan az) için -20°C'de veya uzun süreli saklama (6 aydan fazla) için -80°C'de saklayın. Tekrarlanan donma-çözülme döngülerinden kaçının.
Plazma
EDTA, heparin veya sitratı antikoagülan olarak kullanarak plazma toplayın. Toplamadan sonraki 30 dakika içinde 1000 x g'de 15 dakika santrifüjleyin. Hemen test edin veya örnekleri bölümlere ayırın ve ≤ -20 °C'de saklayın.
Trombositten Fakir Plazma
EDTA, heparin veya sitratı antikoagülan olarak kullanarak plazma toplayın. Toplamadan sonraki 30 dakika içinde 1000 x g'de 15 dakika santrifüjleyin. Tam trombosit temizliği için plazmanın 2-8 °C'de 10,000 x g'de 10 dakika ek santrifüjleme yapılması tavsiye edilir. Hemen test edin veya örnekleri bölümlere ayırın ve ≤ -20 °C'de saklayın.
Hücre Kültürü Süpernatantları
Partikülleri 500 x g'de 5 dakika santrifüjleyerek çıkarın. Süpernatantı çıkarın ve hemen test edin veya örnekleri bölümlere ayırın ve ≤ -20 °C'de saklayın.
Doku Homojenatları
Doku homojenatlarının hazırlanması doku tipine göre değişiklik gösterecektir. Fazla kanı çıkarmak için dokuyu 1X PBS ile yıkayın, 20 mL 1X PBS içinde homojenize edin ve ≤ -20 °C'de gece boyunca saklayın. Hücre zarlarını kırmak için iki donma-çözülme döngüsü gerçekleştirildikten sonra, homojenatları 5000 x g'de 5 dakika santrifüjleyin. Süpernatant hemen çıkarıldı ve test edildi. Alternatif olarak, örnekleri bölümlere ayırın ve ≤ -20 °C'de saklayın.
Hücre Lizatları
Hücreleri lizis bufferında çözün ve buz üzerinde 30 dakika bekletin. İnseviği maddeleri çıkarmak için tüpleri 14,000 x g'de 5 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı yeni bir tüpe bölümlere ayırın ve kalan tüm hücre ekstraktını atın. Toplam protein konsantrasyonunu toplam protein testi kullanarak belirleyin. Hemen test edin veya bölümlere ayırın ve ≤ -20 °C'de saklayın.
Doku Lizatları
Dokusu PBS ile yıkayın, 1-2 mm parçalar halinde doğrayın ve PBS içinde doku homojenizatörü ile homojenize edin. Proteaz inhibitörleri içeren eşit hacimde RIPA buffer ekleyin ve dokuları oda sıcaklığında 30 dakika hafif çalkalayarak lize edin. Kalıntıları çıkarmak için santrifüjleyin. Toplam protein konsantrasyonunu toplam protein testi kullanarak belirleyin. Hemen test edin veya bölümlere ayırın ve ≤ -20 °C'de saklayın.
Tükürük
Tükürüğü bir tüpte toplayın ve 10,000 x g'de 5 dakika santrifüjleyin. Sulu tabakayı toplayın, hemen test edin veya örnekleri bölümlere ayırın ve ≤ -20 °C'de saklayın.
İdrar
Günün ilk idrarını (orta akım) aseptik olarak toplayın, doğrudan steril bir kaba boşaltın. Partikül maddelerini çıkarmak için santrifüjleyin. Hemen test edin veya bölümlere ayırın ve ≤ -20 °C'de saklayın.
İnsan Sütü
2-8 °C'de 1000 x g'de 15 dakika santrifüjleyin. Sulu fraksiyonu toplayın ve bu işlemi toplam 3 kez tekrarlayın. Hemen test edin veya örnekleri bölümlere ayırın ve ≤ -20 °C'de saklayın.
Enkilife Systems, araştırmalarınız için kapsamlı bir ELISA portföyü sunmaktadır.